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示差折光(RID)檢測器-糖成分分析
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方案簡介

許多檢測器用于醫藥實驗室質量控制(QC)分析,如紫外線、熒光、帶電氣溶膠、蒸發光散射和示差折光(RID)檢測器。然而,由于分析物的化學性質不同,這些檢測器都不能推廣到所有藥物的直接分析。如果紫外和熒光檢測器對某些藥物不敏感,RID是最好的選擇。在大多QC實驗室中,RID在簡單性、成本、能耗和可用性方面具有很大優勢,且在食品、化學和藥物分析中有很多應用,例如檢測脂類[1]、碳水化合物[2,3]、蛋白質[4]和蛋白質-核酸復合體[5]。


原理

示差折光檢測器(Refractive Index Detector,RID)是一種通用型檢測器。其原理是待測物與流動相折射率差。對于偏轉式示差折光檢測器,光路在通過兩個裝有不同液體的檢測池時發生偏轉,偏轉的大小與兩種液體之間折光率的差異成比例。光路的偏轉由光敏元件上的位移測得,顯示了折光率的不同。



1.光束 2.樣品池 3.參比池 4.ns>nr時的光束 5.ns=nr時的光束 6.位移 7.光敏接收原件ns樣品腔中液體的折射率 nr參比腔中液體的折射率

光學系統

從鎢燈發射出的光束經過聚光透鏡,狹縫1,準直鏡和狹縫2,再透過檢測池,然后光被檢測池后的反光鏡反射,再通過檢測池、狹縫2、準直鏡和零位玻璃調節器后在光敏元件上顯示出狹縫1的影象。光敏元件上有兩個并排的光敏接收元件。


1.鎢燈 2.聚光透鏡 3.狹縫1 4. 準直鏡5. 狹縫26.檢測池 7. 反光鏡 8. 零位玻璃 9.光接收元件


注意事項

當流動相中含有高濃度的鹽時,用完后一定要用水徹底的沖洗,否則將會由于堵塞流路而中斷檢測器的工作。不要使用任何可能腐蝕材料(比如不銹鋼)的流動相,包括鹽酸。使用這種流動相可能引起基線漂移,損害檢測器。用徹底脫氣過的流動相,單元泵(預混合流動相)。溫度、壓力和流動相組成的微小變化會產生極大的影響,應控制其變化,保持穩定性,減少基線噪音。RID的系統沖洗平衡,需要保證流路中的流動相被完全替換,使儀器達到完全穩定,充分平衡基線。現采用太瑋科技Prevail Carbohydrate ES和JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+ 色譜柱利用RID進行蜂蜜和甘露醇中糖成分的檢測,文中檢測標準參考2020版中國藥典一部 二部方法,測得柱效N>2000,分離度>2, 符合標準要求。



應用一

蜂蜜:果糖、葡萄糖、蔗糖、麥芽糖色譜柱:Prevail Carbohydrate ES  150×4.6mm,2.7μm P/N:9243-1546檢測器:RID流動相:乙腈-水(82:18)預混合柱溫:室溫進樣量:15μL流速:1mL/min

對照品譜圖:



應用二



甘露醇 山梨醇色譜柱:JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+ 8%  300mm×7.8mm  P/N:0219-3078檢測器:RID流動相:水柱溫:80℃進樣量:20μL流速:0.5mL/min對照品譜圖:

結論

 Prevail Carbohydrate ES是專為分離單糖和雙糖類物質而設計的產品,一般使用乙腈水溶液作為流動相,兼容 ELSD,低柱流失;JADE-PAK® Carbohydrate Ca2+色譜柱用于單糖、糖醇、雙糖等物質的分離,具有流動相簡單,高性能色譜柱。


參考文獻[1] A.I. Hopia, V.-M. Ollilainen, Comparison of the evaporative light scattering detector (ELSD) and refractive index detector (RID) in lipid analysis, J. Liq. Chromatogr. 16 (12) (1993) 2469–2482.[2] D.O. Hancock, R.E. Synovec, Microbore liquid chromatography and refractive index gradient detection of low-nanogram and low-ppm quantities of carbohydrates, J. Chromatogr. A. 464 (1991) 83–91.[3] J.L. Ch′avez-Serv?n, ? A.I. Castellote, M.C. L′opez-Sabater, Analysis of mono- and disaccharides in milk-based formulae by high-performance liquid chromatography with refractive index detection, in, J. Chromatogr. A, Elsevier 1043 (2) (2004) 211–215.[4] J. Wen, T. Arakawa, J. Wypych, K.E. Langley, M.G. Schwartz, J.S. Philo, Chromatographic determination of extinction coefficients of non-glycosylated proteins using refractive index (RI) and UV absorbance (UV) detectors: applications for studying protein interactions by size exclusion chromatography with light-scattering, UV, Tech. Protein Chem. 8 (1997) 113–119.[5] E. Folta-Stogniew, Characterization of Protein–Nucleic Acid Complexes by SizeExclusion Chromatography Coupled with Light Scattering, Absorbance, and Refractive Index Detectors, in: Methods Mol. Biol., Humana Press Inc., 2021: pp. 381–395. 


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